Содержание
Диагностика БФ осложняется мультисистемным характером заболевания и неспецифичностью некоторых симптомов (таких, как, например, болевой синдром и желудочно-кишечные расстройства).
Для БФ характерен широкий клинический полиморфизм вследствие накопления липидов в различных клетках. Установление клинического диагноза затрудняется ввиду отсутствия классических признаков БФ, в связи с чем возрастает необходимость в активном взаимодействии между собой врачей широкой и узкой специальностей (педиатров, неврологов, офтальмологов, дерматологов, гастроэнтерологов, кардиологов, ревматологов, генетиков).
Лабораторная диагностика
С целью диагностики болезни Фабри определяют активность альфа- галактозидазы А в плазме или лейкоцитах крови. Диагноз подтверждают путем генотипирования гена альфа-галактозидазы А. В клинических исследованиях в качестве показателя эффективности заместительной терапии используют уровень глоботриаозилсфингозина (лизо-Gb3). Потенциальным биомаркером заболевания считают также экскрецию лизо-Gb3 с мочой.
Определение активности лизосомных ферментов
Золотым стандартом диагностики болезни Фабри является определение активности лизосомного фермента α-галактозидазы А. Снижение активности фермента наблюдается в плазме, лейкоцитах, сыворотке крови, слезной жидкости, в любом биоптате или культуре клеток кожных фибробластов. Альтернативой может быть исследование высушенных капель крови на фильтровальной бумаге (образцы могут храниться в течение нескольких месяцев) с помощью флюориметрического метода. У мужчин сниженная активность α-галактозидазы А является достаточно информативным признаком болезни Фабри и может использоваться в качестве скринингового теста. Однако у трети женщин с болезнью Фабри активность этого фермента может быть нормальной, поэтому надежно исключить или подтвердить диагноз позволяет только генетический тест.
ДНК-диагностика
В случае неоднозначных результатов биохимических исследований у больных, а также с целью проведения пренатальной диагностики на ранних сроках беременности или преимплантационной диагностики, рекомендуется проведение молекулярно-генетических исследований образца ДНК пациента. ДНК может быть выделена из любого биологического материала, содержащего клетки (кровь, клетки слизистого эпителия щеки, волосяные фолликулы, другие ткани, а также слюна, моча), но наиболее часто используют кровь. При проведении дородовой диагностики используют клетки хориона или клетки амниотической жидкости.
Большинство мутаций у пациентов с болезнью Фабри могут быть выявлены с помощью стандартного секвенирования (после выделения ДНК используют полимеразную цепную реакцию для того, чтобы амплифицировать кодирующую область гена; полученный ПЦР-продукт затем подвергается секвенированию (определению нуклеотидной последовательности полученного фрагмента ДНК); последовательность ДНК гена α- галактозидазы А пациента сравнивают с референсной. Молекулярно-генетические исследования гена α-галактозидазы А позволяют выявлять замены нуклеотидов, делеции, инсерции (вставки), частичные дупликации, сложные мутации, вовлекающие более, чем одно молекулярное изменение.
Установление связи между клиническими особенностями заболевания и специфичностью мутации (фенотип-генотип корреляции) требует больших выборок пробандов, несущих одну и ту же мутацию. Вместе с тем, значительное число больных болезнью Фабри развивают «олигосимптоматический» фенотип или атипические варианты течения – так называемые кардиальные или ренальные формы. Подобные маловыраженные фенотипы характеризуются поздним началом, медленным прогрессированием болезни, в более позднем возрастном периоде у них развивается выраженные органные поражения. Результаты последних исследований позволяют предположить, что определенная часть подобных атипичных фенотипов связана с миссенс-мутациями (точечная мутация, в результате которой измененный кодон начинает кодировать другую аминокислоту).
Лабораторный контроль лечения
В качестве основного биохимического теста для лабораторного контроля лечения болезни Фабри применяется количественное определение глоботриаозилцерамида (церамидтригексозида, Gb3) в плазме крови и моче. На фоне проводимой ферментной заместительной терапии концентрация глоботриаозилцерамида снижается. В некоторых клинических исследованиях в качестве показателя эффективности заместительной терапии был использован уровень глоботриаозилсфингозина (лизо-Gb3).